Jensen Ackles urodził się 1 marca 1978 w Dallas w stanie Texas. Ma starszego o trzy lata brata Joshue Ackles i młodszą o siedem siostrę Mackenzie Ackles. Imię zawdzięcza pomysłowości rodziców, którzy stwierdzili, że wszystkie inne imiona są zbyt pospolite, (chociaż początkowo chcieli nazwać syna Justin), a skoro ich dziecko ma tak anielską buźkę musi ono do niej pasować. Swoją edukację rozpoczął w Dartmouth Elementary Richardson w Texasie. Gimnazjum Apollo Junior High Richardson ukończył w 1993 roku. Liceum LV Berkner High School Richardson ukończył w 1996 roku z założeniem, że rozpocznie studia na kierunku rehabilitacja (ze względu na zamiłowanie do sportu i medycyny). Niestety, a raczej na szczęście dla swoich fanów musiał zrezygnować ze swych planów na rzecz aktorstwa. Po ukończeniu liceum przeprowadził się do Los Angeles, aby zastanowić się nad wyborem collegu, oraz aby wypróbować swoje zdolności w show biznesie. Początkowo pracował jako model, co nie było dla niego żadną nowością - przygodę z pozowaniem zaczął dużo wcześniej w wieku... czterech lat! Swoje pierwsze role otrzymał w TV show "Mr. Rhodes" oraz operze mydlanej "Days Of Our Lives". Po roli Bena/Alecka w serialu "Cień Anioła" zyskał duże grono fanów. Później pojawiła się wielka szansa - w castingu do filmu "Tajemnice Smallville" walczył o rolę Clarka Jerome'a Kenta. Przegrał jedynie z Tomem Wellingiem, ale otrzymał znaczącą rolę Jasona Teague. Jensen został zauważony przez reżysera Davida Winklera, który obsadził go w głównej roli Jake'a Cummingusa w horrorze "Devour (2005)". Prawdziwy rozgłos Jensen zyskał po otrzymaniu roli Deana Winchestera w serialu stacji CW "Supernatural", w którym to gra po dziś dzień.